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在ADC（抗體藥物偶聯物）和GPCR（G蛋白偶聯受體）相關藥物研究中，內化研究都具有極其關鍵的重要性，盡管其具體的作用機制和關注點有所不同。內化過程直接影響藥物的療效、特異性、安全性以及耐藥性。

pHSense? Eu探針是瑞孚迪推出的新一代鑭系銪穴狀化合物，專為內化研究而開發。

技術原理：pH驅動的“信號開關”

??胞外狀態（中性pH）：pHSense? Eu探針位于細胞外，熒光信號極低（靜默）。

??內化后（酸性內體/溶酶體）：探針隨ADC/GPCR進入酸性環境，觸發強烈、長壽命的Eu熒光信號。

憑借獨特的二維pH靈敏度特性，pHSense? Eu探針可實現高靈敏、高檢測窗口的ADC/GPCR內化檢測。

pHSense? Eu探針可通過不同形式標記ADC/GPCR，應用廣泛：

ADC內化實驗步驟：整個實驗流程僅需四步，且只需在細胞培養板操作即可。

以貼壁細胞為示例，步驟為：細胞過夜培養-棄培養基上清-加入經pHSense? Eu Fab anti-Human lgG標記的ADC-讀數，全程無需洗滌，支持實時監測。同時，基于酶標儀讀取數值的檢測形式，大大提高了實驗的效率和通量，且支持96&384-wells通量。

實例驗證：下圖左圖使用2nM的pHSense? Eu Fab anti-Human lgG試劑標記后的Trastuzumab抗體，加入過表達HER2的BT-474細胞中，37°C孵育，使用酶標儀動態檢測620nm發射光，隨著時間可清晰觀察到特異性抗體內化信號，而Irrelevant IgG1和Fab探針單獨對照組隨著時間推移信號保持不變，且始終表現出極低的背景信號。

右圖使用pHSense? Eu Fab anti-Human lgG試劑標記不同濃度的Enfortumab-vedontin ADC，加入表達了Nectin-4的SUM190-PT細胞中，37°C孵育5小時后用酶標儀檢測620nm發射光，檢測出的EC50值與已發表文獻一致。

GPCR內化實驗步驟：以Anti-Flag為例（適用于帶有Flag標簽的GPCR）：

（1）細胞鋪板過夜→棄上清

（2）加入pHSense? Eu探針→孵育

（3）加入化合物（激動劑/拮抗劑）

（4）酶標儀讀數（可實時監測）

實例驗證：下圖結果清晰顯示Exendin-4濃度依賴的內化響應，信號強度隨激動劑濃度升高而顯著增加。

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